Tumbuhan Pepolo (Biscovia javanica Blume) merupakan tumbuhan yang banyak digunakan sebagai obat tradisional sehingga perlu dikontrol keamanan penggunaanya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas akut dan lethal dose 50 serta kriteria ketoksikan ekstrak etanol daun Pepolo (B. javanica Blume) terhadap mencit putih (Mus musculus). Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan etanol 96% pa. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental murni dengan hewan uji mencit putih (M. musculus) betina sebanyak 25 ekor yang dibagi menjadi lima kelompok. Tiap kelompok menerima seri dosis yang berbeda yaitu 1g/kgBB; 2g/kgBB; 4g/kgBB; 8g/kgBB dan dosis 16g/kgBB ekstrak etanol daun pepolo dengan sekali pemberian secara oral dan diamati gejala ketoksikan dan jumLah kematian pada tiap hewan uji setelah 24 jam. Hasil penelitian menunjukan LD50 ekstrak etanol daun pepolo (B. Javanica Blume) adalah 3,91 g/kgBB dan nilai rentang LD50 ekstrak etanol daun pepolo (B. javanica Blume) adalah 2,6 g/kgBB ? 5,7 g/kgBB. Berdasarkan tabel kategori ketoksikan, ekstrak etanol daun Pepolo (B. javanica Blume) termasuk dalam kategori cukup toksik (0,5 - 5g/kgBB).