ABSTRAKProduksi rumput laut di Indonesia pada tahun 2016 meningkat hampir 4 kali lipat dari tahun 2010. Nilai ini menunjukkan potensi rumput laut yang sangat besar. Jenis yang paling sering dimanfaatkan yaitu Eucheumma cottonii sebagai penghasil karagenan, yang berpotensi sebagai prebiotik karena mengandung galakto-oligosakarida. Tujuan dari penelitian ini yaitu mendapatkan perlakuan lanjut terhadap hidrolisat agar mendapatkan aktivitas prebiotik yang paling baik serta mengkarakterisasi sifat prebiotik dari hidrolisat. Tahapan penelitian meliputi pre hidrolisis, hidrolisis dengan campuran asam sulfat dan kultur inaktif, perlakuan lanjutan dengan 3 jenis (penyaringan, pengendapan, dan tanpa perlakuan), karakterisasi kimia dan mikrobiologis serta pengujian kadar galaktosa dengan HPLC. Hasil dari penelitian ketiga sampel jenis perlakuan, ternyata tanpa perlakuan mempunyai hasil yang paling baik dibandingkan kedua perlakuan yang lain, dengan nilai kadar gula reduksi sebesar 0.37%, total gula 2.88%, pH 4.95, total asam 0.15%, total BAL 62 à 107 CFU/ml, kadar galaktosa dan GOS masing-masing sebesar 0.14% dan 1.18% ABSTRACTIndonesiaâs seaweed production in 2016 increased almost 4-fold from 2010. This value indicates a great potential of the seaweed. The most widely used type is Eucheuma cottonii which utilized in carrageenan production. In addition, E. cottonii has potential as a prebiotic due to the galacto-oligosaccharides component. The purpose of this sudy was to determined the best types of treatment of hydrolisate for reached probiotic activity and characterized probiotic content of hydolisate. The preparation stage consists of pre-hydrolysis, hydrolysis using sulfuric acid and inactive culture, and followed by three different types of treatment (filtration, precipitation and without any treatment). The analytical stage consists of chemical and microbiological characterization, measured galactose using HPLC. The results showed that untreated samples had the best results compared with the other two treatments, with reduction sugar content 0.37%, total sugar 2.88%, pH 4.95%, total acid 0.15%, total BAL 62 à 107 CFU/ml, galactose and GOS content are 0.14% and 1.18%