Kebutuhan bahan bakar minyak yang semakin meningkat mengakibatkan perlu adanya upaya memanfaatkan sumber energi terbarukan. Alternatif yang ideal adalah memanfaatkan jarak pagar karena potensi minyak bijinya yang dapat dipakai sebagai biodiesel dan dapat mereduksi emisi gan CO2. Sebelum melakukan analisis lebih lanjut, perlu dilakukan optimasi kondisi reaksi PCR dengan primer gen CpTI. Optimasi prosedur PCR merupakan proses yang kompleks dan memakan banyak waktu karena meliputi pengaturan beberapa parameter yaitu MgCl2, DNA template, konsentrasi primer, dan suhu annealing selama amplifikasi. Optimasi ini berguna untuk menghindari produk amplifikasi yang tidak spesifik seperti munculnya smear dan tidak adanya kesesuaian dengan ukuran gen CpTI yaitu 415 bp. Hasil penelitian ini adalah menemukan suhu annealing yang cocok digunakan yaitu pada suhu 48 ºC karena menghasilkan pita DNA yang sesuai dan tidak terlalu banyak smear. Kata kunci : Jarak Pagar, Optimasi, PCR, gen CpTI