Kehamilan dengan HIV (Human Immunodefisiensy Virus) merupakan penyakit menular. Hasil studi pendahuluan yang dilakukan masih banyak ibu hamil yang belum melakukan tes HIVdan kurangnya pengetahuan ibu hamil.Untuk itu perlu diberikan informasi mengenai Eliminasi penularan HIV dari Ibu ke Anak. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan pengetahuan ibu hamil sebelum dan sesudah diberikan pendidikan kesehatan menggunakan media flipchart di Desa Brosot Wilayah Puskesmas Galur I Kabupaten Kulon Progo. Penelitian ini menggunakan rancangan one group pretest-posttest. Populasi dalam penelitian ini adalah seluruh ibu hamil trimester I di Desa Brosot yang berjumlah 30 orang. Pengembilan sampel menggunakan Sampling Jenuh berjumlah 30 orang yang terbagi menjadi 15 orang kelompok eksperimen dan 15 orang kelompok kontrol. Instrumen yang digunakan yaitu flipchart dan kuesioner tentang Eliminasi Penularan HIV dari Ibu ke Anak. Hasil penelitian menunjukkan ada pengaruh yang signifikan antara pendidikan kesehatan terhadap pengetahuan ibu hamil tentang penularan HIV dari ibu ke anak dengan menggunakan media flipchart di Desa Brosot Wilayah Puskesmas Galur I Kabupaten Kulon Progo dengan hasil uji Z pada kelompok control menunjukkan Z hitung sebesar -2,781 pada signifikansi 0,000 (sig.p < 0,05) sedangkan pada kelompok eksperimen terdapat peningkatan pengetahuan nilai Z test dari hasil pengujian ialah -2,761 dengan asymp.sig sebesar 0,005 (asymp.sig < 0,05). Tenaga Kesehatan dapat memberikan informasi kepada ibu hamil tentang Penularan HIV dari Ibu ke Anak, agar ibu hamil dapat melakukan pemeriksaan sedini mungkin/pada Trimester I. Kata kunci : HIV, Flipchart,ibu hamil.