Penelitian ini untuk mengetahui bagaimana proses ozonisasi berpengaruhterhadap kualitas Air Susu. Penelitian dilakukan secara eksperimental denganmenggunakan “Split Plot Design” pola faktorial 3x3 (suhu awal dan lama kontak)dengan tiga kali ulangan. Peubah yang diukur adalah prosentase kematian totalmikroorganisme, bakteri patogen, kadar protein, lemak dan uji inderawi. Hasilpenelitian menunjuk kan bahwa dengan perlakuan ozonisasi, prosentasekematian total mikroorganisme mencapai 94,50%, kematian bakteri patogenE.coli mencapai 97,19%, Staph.aureus mencapai 95,97%,. Suhu awal dan lamakontak yang efektif adalah 1oC selama 10 menit. Proses ozonisasi tidakberpengaruh terhadap, warna, rasa dan konsistensi air susu kecuali terhadapbau. Selain itu ozonisasi meningkatkan kadar protein dan lemak. secaraproposional. Daya simpan air susu produk ozonisasi pada temperatur kamartahan sampai 19 jam.Kata kunci : Ozonisasi, kualitas, jumlah kematian