Karies gigi yang mencapai pulpa dapat menyebabkan nekrosis pulpa. Bakteri yang dapat menyebabkan nekrosis pulpa, salah satunya Staphylococcus aureus. Perawatan terhadap nekrosis pulpa adalah dengan melakukan perawatan saluran akar (PSA). Salah satu tahapan dalam PSA adalah sterilisasi saluran akar dengan menggunakan kalsium hidroksida (calcium hydroxide) atau kresotin (cresotin). Penggunaan obat kimia, utamanya dalam jangka panjang, dapat menimbulkan efek samping, sehingga diperlukan bahan alternatif lain yang lebih aman dan alami, seperti penggunaan jintan hitam (Nigella sativa). Zat aktif yang terkandung dalam jinten hitam dapat bersifat sebagai antibakteri diantaranya adalah tannin, terpenoid, saponins, alkaloids. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektifitas ekstrak jinten hitam dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus secara invitro dengan metode difusi agar. Penelitian ini menggunakan ekstrak biji jintan hitam (Nigella sativa) dengan konsentrasi 50%, 75% dan 100%. Rancangan penelitian yang digunakan adalah penelitian Post Test Only Control Group Design, yang terdiri dari lima kelompok yakni, kelompok kontrol negatif (aquadest steril), kelompok perlakuan 1 (ekstrak jintan hitam konsentrasi 50%), kelompok perlakuan 2 (ekstrak jintan hitam konsentrasi 75%), kelompok perlakuan 3 (ekstrak jintan hitam konsentrasi 100%) dan kelompok kontrol positif (cresotin). Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan besar sampel yakni pengulangan sebanyak lima kali untuk setiap kelompok. Hasil uji statistik dengan man witney U terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro. Simpulan deari penelitian ini bahwa ekstrak jintan hitam (Nigella sativa) dengan konsentrasi 50%, 75% dan 100% dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro.