Usaha jamu tidak wajib mempunyai izin edar, karena itu keamanan, khasiat dan mutu masih cukup rendah. Parameter untuk pengukuran cemaran mikroba yang terdapat dalam jamu menggunakan Angka Lempeng Total. Jamu yang digunakan yaitu jamu daun pepaya temu ireng, kunyit asam, dan pahitan brotowali. Penelitian ini bertujuan mengetahui ALT pada jamu gendong di pasar Tanjung Rejo, Kabupaten Sukoharjo. Penelitian ini adalah penelitian deskriptif. Penelitian dimulai penentuan dan pemilihan tempat pengambilan sampel. Langkah selanjutnya mempersiapkan bahan dan alat yang digunakan untuk uji ALT. Langkah pertama untuk uji ALT yaitu membuat pengenceran sampel jamu sebanyak 10-5 dengan cara sampel jamu diambil 1 ml dan NaCL 0,9% sebanyak 9 ml. Uji ALT menggunakan media Nutrient Agar. Kemudian di inkubasi selama 24 jam dengan posisi terbalik, dan hasilnya dibaca dengan colony counter. Pada penelitian didapatkan nilai ALT jamu gendong di pasar Tanjung Rejo, Kabupaten Sukoharjo untuk jamu daun pepaya temu ireng 1,4x107 koloni/ml - 5,2x107 koloni/ml, jamu kunyit asam 1,5x102 koloni/ml - 8,9x102 koloni/ml, jamu pahitan brotowali <1x101 koloni/ml - 2,8x103 koloni/ml. Hasil Angka Lempeng Total jamu daun pepaya temu ireng tidak memenuhi persyaratan peraturan BPOM No. 32 th 2019. Hasil Angka Lempeng Total jamu kunyit asam dan jamu pahitan brotowali memenuhi persyaratan peraturan BPOM No. 32 th 2019. Kata kunci : jamu gendong, angka lempeng total