Fenilbutazon telah digunakan selama bertahun-tahun untuk mengobati Rheumatoid arthritis karena sifat analgetiknya serta memiliki daya anti inflamasi yang kuat. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh validasi metode analisis fenilbutazon dalam vesikel etosom secara spektrofotometri UV-Vis yang valid. Analisis kadar fenilbutazon dilakukan dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 266nm. Parameter validasi metode dalam penelitian ini meliputi linieritas, batas deteksi, batas kuantifikasi, presisi, akurasi dan spesifisitas. Berdasarkan hasil validasi yang dilakukan diketahui parameter linearitas yang ditunjukkan dengan nilai koefisien korelasi (r) sebesar 0,999 dengan persamaan y = 0,036x + 0,305, batas deteksi 0,556 µg/mL dan batas kuantifikasi sebesar 1,855 µg/mL, parameter presisi yang dinyatakan dengan %RSD sebesar 0,088% untuk presisi intraday dan presisi interday rata rata %RSD adalah 0,152%, parameter akurasi berdasarkan %recovery dengan standar adisi 2 µg/mL, 6 µg/mL dan 10 µg/mL berturut-turut adalah 103,03%, 100,60% dan 101,84% serta parameter spesifisitas, terbentuk puncak dengan λ maks yang sama dengan standar.