Mikroorganisme mengembangkan berbagai tipe mekanisme pertahanan yang berbeda-beda. Salah satunya adalah pembentukan biofilm. Biofilm merupakan kumpulan dari mikroorganisme terkait permukaan yang heterogen terselubuh di dalam matriks polimer yang diproduksi sendiri yang terdiri dari polisakarida, protein, dan DNA. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis pertumbuhan biofilm bakteri Gram-negatif Escherichia coli pada media Tryptic Soy Broth. Metode yang digunakan adalah microtiter-plate 96 wells. Dilakukan sebanyak enam kali replikasi dan pembacaan Optical Density (OD) menggunakan ELISA reader pada Panjang gelombang 570 nm. Hasil penelitian didapatkan rerata OD 2,810 dengan standar deviasi 0,402. Sehingga dapat ditarik kesimpulan, Escherichia coli termasuk ke dalam kategori bakteri pembentuk biofilm yang kuat.