Nilai gizi yang tinggi pada susu merupakan media yang baik untuk pertumbuhan berbagai macam mikroorganisme, baik yang menguntungkan maupun yang dapat membahayakan manusia. Penelitian ini bertujuan menganalisis kemampuan Lactobacillus sp yang diisolasi dari susu segar terhadap bakteri patogen Gram (+) dan Gram (-) yaitu Salmonella sp, Streptococcus mutan secara in vitro. Hasil penelitian menunjukkan total populasi BAL pada susu segar kemasan adalah 200x108 CFU/g. Pada pewarnaan Gram menujukkan hasil pewarnaan Gram yang positif, sedangkan pada uji katalase menjukkan reaksi yang negatif dan uji aktivitas antimikroba yang menggunakan metode difusica kram MRS broth. Susu segar kemasan mampu menghambat Salmonella sp dengan zona hambat tertinggi adalah 11,925 mm sedangkan pada Streptococcus mutans mampu menghambat dengan zona tertinggi yaitu 13,45 mm.