Air minum isi ulang menjadi alternatif masyarakat untuk memenuhi kebutuhan air minum. Proses pengolahan Air minum isi ulang rentan terhadap kontaminasi dari mikroorganisme terutama bakteri coliform. Kontaminasi bakteri coliform disebabkan oleh pencemaran pada air baku, jenis peralatan yang digunakan, kurangnya pengetahuan tentang hygiene dan sanitasi Depo air minum isi ulang. Tujuan penelitian ini mengetahui keberadaan coliform pada depo air minum isi ulang di gambirsari Surakarta. Jenis penelitian Deskriptif untuk menguji dan menganalisis sampel air minum isi ulang. Sampel penelitian ini adalah air isi ulang yang berada di depo gambirsari Surakarta sejumlah 11 depo. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 81,8 % depo memiliki kualitas air minum yang tidak memenuhi persyaratan secara mikrobiologi yang telah ditetapkan berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan No. 492 tahun 2010 yaitu telah melebihi 0 CFU/100 mL, terdapat 9 depo yang terdapat bakteri coliform. Dari 9 depo yang terdapat kandungan coliform ada satu depo yang kandungan coliformnya sampai kategori Terlalu Banyak diHitung (TBUD). Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa 81,8 % air minum isi ulang dari depo terindikasi mengandung bakteri coliform, hal tersebut dapat dipengaruhi oleh sumber air baku, sistem desinfeksi/sterilisasi, hygiene dan Sanitasi Karyawan, proses pengolahan, dan Kondisi Depo.