Suhu penyimpanan ASI dapat mempengaruhi total koloni Bakteri Asam Laktat, total koloni bakteri aerob dan keasaman di dalam ASI. Jenis penelitian ini merupakan penelitian observasional dengan desain cross sectional comparatif. Populasi penelitian ini adalah ASI yang didapatkan dari ibu-ibu yang menitipkan anaknya di TPA kelurahan Koto Tangah Padang. Sampel pada penelitian ini adalah semua populasi yang memenuhi kriteria inklusi dan eksklusif. Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa Suhu penyimpanan ASI mempengaruhi total koloni Bakteri Asam Laktat (BAL), tetapi tidak ada pengaruh suhu penyimpanan ASI terhadap total koloni bakteri aerob dan keasaman di dalam ASI.