Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dan mengungkap cacah individu, keanekaragaman dan dominansi ikan serta kualitas perairan di Sungai Pelus wilayah Kabupaten Banyumas tahun 2019. Metode yag digunakan adalah survey dengan teknik purposive random sampling. Pengambilan sampel dilakukan pada bulan Januari – Juni tahun 2019 sebanyak enam kali interval waktu selama satu bulan yaitu waktu siang hari (pukul 07.00 – 10.00) dan malam hari (pukul 19.00 – 22.00). Pengambilan sampel ikan dan pengukuran parameter kualitas air dilakukan di tiga lokasi penelitian, yaitu Lokasi I di Desa Pandak sebagai daerah hulu, Lokasi II di Desa Arcawinangun sebagai daerah pertengahan, dan Lokasi III di Desa Pajerukan sebagai daerah hilir. Hasil sampling diidentifikasi dan diverifikasi di www.fishbase.org. Hasil penelitian memperoleh cacah individu sebanyak 351 ekor ikan yang termasuk ke dalam 17 spesies, 9 famili dan 5 ordo. Indek keanekaragaman ikan tergolong rendah yaitu kisaran antara 0,1 – 0,27 dengan rata-rata sebesar 0,16. Indeks dominansi ikan di Sungai Pelus tergolong sedang dengan nilai kisaran antara 0,001 – 1,000 dengan rata-rata 0,318 hal ini disebabkan adanya dominansi famili Cyprinidae. Kualitas perairan masih tergolong baik untuk kehidupan ikan.Â