ABSTRAK: Cendana (Santalum album L.) merupakan tanaman endemik Nusa Tenggara Timur yang secara tradisional telah digunakan untuk mengobati berbagai macam penyakit termasuk infeksi. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform, dan n-butanol ekstrak daun cendana (Santalum album L.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli serta menentukan konsentrasi hambat minimum dan mengidentifikasi komponen senyawa pada fraksi paling aktif. Serbuk daun cendana dimaserasi dengan metanol dan ekstrak metanol yang diperoleh kemudian difraksinasi berturut-turut dengan n-heksana, kloroform, dan n-butanol. Masing-masing fraksi yang diperoleh diuji aktivitas antibakterinya dengan metode sumur difusi. Hasil penelitian menunjukkan fraksi n-heksana mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan diameter zona hambat sebesar 19,30 mm dan memberikan daya hambat minimum 7,5 mm pada konsentrasi 17% (b/v), tetapi tidak menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli. Sementara untuk fraksi kloroform dan n-butanol tidak menunjukkan aktivitas antibakteri tehadap kedua bakteri uji. Pemisahan fraksi aktif n-heksana dengan kromatografi kolom dengan eluen n-heksan:etil asetat (8:3), memberikan 6 fraksi gabungan (A,B,C,D,E,F), dan fraksi B menunjukkan aktivitas antibakteri relatif paling besar dengan diameter zona hambat 10,60 mm. Hasil identifikasi fraksi aktif B dengan GC-MS menunjukkan terdapat lima belas senyawa dan tiga diantaranya dengan persentase area terbesar yaitu lupeol, nerolidol, dan sitostenone yang merupakan senyawa golongan terpenoid diduga berkontribusi terhadap aktivitas antibakterinya. Kata kunci: cendana, antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, terpenoid. ABSTRACT: Sandalwood (Santalum album L.) is an endemic plant of East Nusa Tenggara whicht has been traditionally used to treat various diseases including infection.. The aim of this research was to determine antibacterial activity of n-hexane, chloroform, and n-buthanol fractions of methanol cendana leaf extract toward Staphylococcus aureus (S.aureus) and Escherichia coli (E.coli) bacteria and minimum inhibitory concentration of active fraction and to identify chemical consituents of the active fraction. Cendana leaf powder was macerated with methanol to yield crude methanol extract which was then fractionated into n-hexane, chlorofrom, and n-buthanol fractions respectively. Each fraction was tested for its antibacterial activity using well diffusion method. The most active fraction was separated using column chromatography and identified using GC-MS (Gas Chromatography-Mass Spectrometer). The antibacterial activity test showed the n-hexane fraction was able to inhibit the growth of S.aureus with inhibition zone diameter of 19.30 mm and minimum inhibitory concentartion at 17 % (w/v) with inhibition zone diameter of 7.50 mm but it did not inhibit the growth of E.coli, while chloroform and n-buthanol fractions did not inhibit the growth of both S. aureus and E. coli. The separation of n-hexane active fraction on column chromatography eluted with n-hexane: ethyl acetate (8:3) gave six fractions (A,B,C,D,E,F) and fraction B was the most relatively active toward S.aureus with inbition zone diameter of 10.60 mm. Identification of fraction B showed fifteen compounds and three of them with high percentage area were identified as lupeol nerolidol and sitostenone, a terpenoid compounds, which may contribute for the actibacterial activity.