Penelitian ini berjutuan untuk mengetahui ada tidaknya Escherichia coli pada mata air Skyline. Pengujian kualitas Air pada mata air  dilakukan dengan menggunakan Uji perkiraan (Presumtive Test), Uji penegasan (Confirmatotry Test) dan Tes Lengkap (Complete Test). Melalui tahapan pengujian, selanjutnya ke tahapan kultur, MC, sub kultur, gram dan uji biokimia. Hasil uji yang diperoleh di laboratorium selanjutnya dideskripsikan dan tabulasi serta analisis. Hasil uji menunjukkan bahwa keseluruhan sampel (100%) tidak terkontaminasi oleh Escherichia coli (MS: Tidak Memenuhi Syarat), sehingga ketiga sumber air tersebut tidak memenuhi syarat kualitas air minum. Kualitas air bersih secara bakterialogi untuk keseluruhan sampel masih termasuk kelas A dengan criteria air yang baik dikarenakan jumlah coliform totalnya masih kurang dari 50 MPN/100 mL. Pemeriksaan Escherichia coli di wilayah Skyline Kelurahan Entrop Distrik Jayapura Selatan Kota Jayapura dapat disimpulkan bahwa semua sumber mata air tidak terkontaminasi Escherichia coli dan dapat pergunakan sebagai air minum, masak, cuci dan kakus. Kata Kunci: Escherichia coli, Mikrobiologi, Pemeriksaan, Mata Air